新的检测方法可以快速、灵敏地检测沙眼衣原体

　　科学家开发了一种新的检测方法，可以快速、灵敏地检测人类最常见的性传播感染——沙眼衣原体。据《分子诊断杂志》报道，这一过程耗时不到20分钟，可以在患者就诊期间的护理点(POC)轻松完成。

　　影响5%至10%的人口，尤其常见于25岁以下的年轻人。由于其普遍性和潜在的严重长期后果，它是一个重大的公共卫生问题。它如此普遍的一个主要原因是，在大多数情况下(75%的女性和50%的男性)，几乎没有症状，因此经常被诊断出来。感染与男性的非淋球菌性尿道炎和女性的几种炎性生殖道综合征(如宫颈炎症和盆腔炎)有关。未经治疗，这种感染会增加异位妊娠的风险，是全球女性不孕的主要原因之一。

　　该检测方法采用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)，一种核酸扩增技术(NAAT)，直接从尿液样本中检测。由于这种新方法不需要从尿液样本中纯化总DNA，因此不需要专门的设备。这一过程明显更省力、更省时，因此也更便宜。它执行起来相对简单，因此可以应用于许多POC设置。

　　爱沙尼亚塔尔图大学分子生物技术教授、瑞典斯德哥尔摩大学神经化学教授lo Langel博士说:“与目前可用的POC测定法相比，该测定法能够进行高度特异性的检测，灵敏度水平显著提高。”

　　现有的基于聚合酶链反应(PCR)的检测技术得到了广泛的应用，但只适用于拥有训练有素的工作人员和昂贵机器的医院。研究表明，高达50%的患者再也没有回来获得诊断结果或所需的治疗。

　　虽然已经开发了几种快速诊断POC测试，但没有一种能够提供与基于医院的技术相当的灵敏度。最近的独立研究表明，目前可用的POC测试的灵敏度仅为10%至40%。对新方法性能的初步分析表明，特异性为100%，灵敏度为83%，证明了其潜在的可靠性。

　　“现有POC检测的性能差得惊人，限制了它们的广泛使用，显然需要更敏感和更具成本效益的诊断平台。因此，需要一种适用的现场测试，提供合理敏感的检测，”Langel教授总结道。

　　研究的技术细节

　　重组酶聚合酶扩增(RPA)是一种核酸扩增技术(NAAT) -一种在体外从一个原始模板合成许多DNA或RNA副本的实验室技术。这些技术彻底改变了诊断技术。目前能够实时检测扩增的技术正迅速成为诊断行业的标准。

　　细胞包含有许多编码序列的质粒(与染色体DNA分离的小DNA分子)。为了通过RPA鉴定和扩增，研究人员选择了在性传播菌株中保守的基因(CDS2)中的一个基因片段。该分析不需要从尿液样本中纯化总DNA。在90℃下加热样品5分钟，足以释放足够数量的扩增靶，以确定病原体是否存在。尿液中含有聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)抑制剂，但最多添加5 μl的尿液不影响RPA的敏感性，而添加10 μl的尿液则显著影响扩增效率。

　　这里开发的分析能够检测到至少50个CDS2靶标拷贝。根据菌株和发育阶段的不同，每个基本体平均含有4到10个质粒拷贝。因此，RPA测定的最低可检测量每次反应可翻译为5至12种病原体，与其他基于核酸扩增的技术处于相同的范围。

　　对爱沙尼亚一家性健康诊所的70名患者(51名女性和19名男性)的尿液样本进行了检测。样品采用RPA和Roche Cobas Amplicor平行检测。

　　58个样本在两项检测中均呈阴性。由于没有检测到假阴性，RPA检测的临床特异性可以估计为100%。

　　使用罗氏法检测的12个样本呈阳性。其中10例RPA反应呈阳性，2例RPA反应呈阴性。基于这些结果，RPA检测的临床敏感性可估计为83%。

　　在12名检测呈阳性的患者中，有3人抱怨出现了症状。其他9例患者无症状。在58例阴性患者中，15例(26%)主诉可能与感染相关的症状。其中一人被检测出感染了艾滋病。其他被诊断为膀胱炎症(2例)、细菌性阴道病(5例)、酵母菌感染(4例)或非妇科原因的腹痛(3例)。